海芋不同提取部位对大鼠酵母性发热的抑制作用及对下丘脑中PGE2含量的影响
作者：张俊荣 李育浩 吴清和 龙 成 韩 坚
单位：广州中医药大学中药学院，广州市机场路12号大院(5104050)
关键词：海芋；药理学；解毒清热；PGE2；疾病模型；大鼠
新中医990521 提 要 用水提醇沉法对海芋分部提取，并观察不同提取部位对大鼠酵母性发热的抑制作用及对大鼠下丘脑中前列腺素E2(PGE2)含量的影响。结果表明：海芋对大鼠酵母性发热抑制的有效部位主要在醇溶部分；大鼠酵母性发热的体温上升与下丘脑中PGE2含量上升呈中度正相关(r＝0.7254，P<0.001)；海芋解热作用机理与其对下丘脑中PGE2升高的抑制有关。
海芋[Alocasia odora(Roxb.)C.Koch]是岭南地区常用的民间草药，具有清热解毒、消肿散结之功。在已往的实验中，我们观察到海芋及其不同炮制品对干酵母性大鼠发热有抑制作用[1]。本实验用水提醇沉法把海芋分部提取，并观察不同提取部位对大鼠酵母性发热的抑制作用及对下丘脑PGE2含量的影响，以探讨其解热作用的有效部位及作用机理。
, 百拇医药
1 材料
1.1 药物制备 海芋鲜品采自白云山，取其根茎，洗净，削去粗皮，切片晒干。生品煎煮沸10小时，经低温浓缩至所需浓度备用，作为生药用药。另取生品10小时煎煮液，经低温浓缩至浓度为1∶1.6，加入95%乙醇，用酒精仪调节含醇量至75%，放置过夜，过滤，分别收集滤液和沉淀物。滤液减压回收乙醇，水浴飞去残醇，浓缩至所需浓度，为醇溶品；沉淀物加适量水溶解，水浴飞去残醇，浓缩至所需浓度，为非醇溶品。
阿斯匹林，广州明兴制药厂产品，批号为961205。
1.2 动物 SD系大白鼠，雄性，体重110～130 g，由广东省卫生厅医用实验动物场提供。
1.3 仪器及试剂 电脑数字型体温计，欧姆龙(中国)有限公司产品，型号为MC-3B。干酵母，法国Marcg产品。批号为940603。3H-PGE2放免试剂盒，由北京东亚免疫技术研究所提供。
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2 方法
2.1 发热大鼠制备 参照文献方法[2]，将大鼠先于实验室(温度20℃±0.5℃，湿度40%～50%)中适应3天，每天测肛温2次，3天后进行正式实验。正式实验时，取适应好的大鼠，分成正常组、模型组、阳性组、模型+生药组、模型+醇溶品组、模型+非醇溶品组等6组，除正常组8只外，余均为10只。测定基础体温后，除正常组外，于大鼠背部皮下注射200 g/L干酵母生理盐水10 ml/kg，并于皮下注射4小时后，除正常组外，各组分别给予蒸馏水、阿斯匹林0.1 g/kg、生药、醇溶品、非醇溶品口服灌胃，后二者用从相同生品中的提取量，即均表示为相当于生品用量32 g/kg，给药容积均为10 ml/kg。皮下注射6小时后，即达发热高峰时，测量体温。以致热后6小时的体温减去基础体温作为发热峰值(△T)。
2.2 下丘脑的制备 待测完致热6小时后体温，立即断颈处死大鼠，参照文献方法[3]，沿上颌从颈椎处剪下头部，破坏颅底骨，在1分钟内采取下丘脑。下丘脑作为一团块取出，前面限制在视交叉前2 mm，后面至乳头体，侧面从下丘脑裂纹至离其底面3 mm的组织。取出后立即放入-20℃冰箱中保存。
, 百拇医药
2.3 PGE2含量测定 下丘脑中PGE2含量测定照说明书进行，最后在本校核医学教研室测量。以logit B/Bo为纵坐标，标准浓度为横坐标，依据样品管的结合率从标准曲线上查出样品浓度，以pg/mg湿重计。
2.4 资料统计 以发热峰值(△T)均数，PGE2含量均数作为评价指标，组间差异显著性用t检验，二者关系用直线相关分析方法。
3 结果
3.1 海芋对大鼠酵母性发热的抑制作用及对下丘脑中PGE2含量的影响，见附表。
附表 海芋对大鼠酵母性发热的抑制作用及对下丘脑中PGE2含量的影响(
±SD)
, http://www.100md.com
组 别
动物数(只)
剂量(g/kg)
△T(℃)
下丘脑中PGE2含量(pg/mg湿重)
正常组
8
-
0.05±0.28
2014.95±1270.76
模型组
10
, 百拇医药
-
1.60±0.37△
6852.18±2127.08△
阳性组
10
0.1
-0.48±0.31※ ※
1040.09±332.80※ ※
模型+生药组
10
32
, http://www.100md.com
0.99±0.73※
2282.73±257.82※ ※
模型+醇溶品组
10
32
0.66±0.23※ ※
1349.02±131.32※ ※
模型+非醇溶品组
10
32
1.34±0.72
, http://www.100md.com
2698.38±225.94※ ※
(注：△模型组与正常组比较，P<0.001；与模型组比较，※P<0.05，※※P<0.001)
结果显示，注射干酵母后6小时，大鼠体温及下丘脑PGE2都明显升高，模型组与正常组比较P<0.001。海芋生药、水提物醇溶部分能抑制大鼠酵母性体温升高(P<0.05，P<0.001)，而非醇溶部分没有抑制作用(P>0.20)，并且醇溶性部分显示比生药有更强的抑制趋势，说明海芋解热的有效部位主要在醇溶性部分。
以所有大鼠下丘脑PGE2含量对发热高峰作直线相关分析，二者成中度正相关(r＝0.7254，P<0.001)。海芋能抑制下丘脑中PGE2含量的升高(P<0.001)，显示海芋解热作用与其对下丘脑PGE2的抑制有关。
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4 讨论
多种外源性的致热因子(如病原微生物、毒素、炎症灶等)均可刺激血液或组织中的吞噬细胞合成单释放内源性的致热源(EP)，并通过前列腺素(PG)，环核苷酸(CAMP)等中枢发热介质，主要作用于视前区-前下丘脑下部(POAH)的体温调节中枢，引起产热和/或散热中枢兴奋性的改变，引起发热反应[4]。
本实验采用干酵母性大鼠发热模型，揭示了海芋解热的有效部位主要在水提物醇溶性部分，表明其有效成分可能是生物碱、皂甙类物质。
对前列腺素和cAMP作为中枢发热介质，国外学者趋向于这样一种共识[5]：即PGE2不是神经介质，它或者其它PG可以诱生一种神经递质样物质，再引起调定点上移，并认为这种物质就是cAMP。国内有学者也观察到[6]，用降钙剂EGTA给家兔侧脑室注射后，脑脊液中cAMP比PGE2对体温上升具有更大的相关性。本实验直接测量下丘脑组织中PGE2含量，结果显示大鼠酵母性发热时体温上升与下丘脑中PGE2浓度升高呈中度正相关(r＝0.7254，P<0.001)，同时，在实验中，模型+非醇溶品组下丘脑中PGE2含量与模型组比较有显著降低(P<0.001)，而没有明显的解热作用，说明大鼠酵母性发热中枢介质除PGE2外，还有更深层的作用机制，是否为cAMP，值得进一步探讨。海芋能够抑制下丘脑中PGE2含量的升高，部分地解释了海芋解热作用的中枢作用机制。
, http://www.100md.com
(本实验得到本校核医学教研室老师的大力帮助，在此表示衷心谢意!)
参考文献
[1] 张俊荣，李育浩，吴清和，等.海芋及其不同炮制品煎剂解热作用初步实验研究.新中医，1997，29(8)∶31
[2] 陈 奇.中药药理实验方法学.北京∶人民卫生出版社，1993.298
[3] 徐叔云.药理实验方法学.第2版.北京∶人民卫生出版社，1994.2561
[4] 李楚杰.临床病理生理学(上册).广州∶广东科技出版社，1990.119～144
[5] Dinarello CA，et al.New concepts on the pathogenesis of fever，Rev Inf Dis，1988，(10)∶168
[6] 李楚杰.发热机制研究的新进展.中国病理生理杂志，1990，6(5)∶379
(修回日期：1998-10-21), 百拇医药
单位：广州中医药大学中药学院，广州市机场路12号大院(5104050)
关键词：海芋；药理学；解毒清热；PGE2；疾病模型；大鼠
新中医990521 提 要 用水提醇沉法对海芋分部提取，并观察不同提取部位对大鼠酵母性发热的抑制作用及对大鼠下丘脑中前列腺素E2(PGE2)含量的影响。结果表明：海芋对大鼠酵母性发热抑制的有效部位主要在醇溶部分；大鼠酵母性发热的体温上升与下丘脑中PGE2含量上升呈中度正相关(r＝0.7254，P<0.001)；海芋解热作用机理与其对下丘脑中PGE2升高的抑制有关。
海芋[Alocasia odora(Roxb.)C.Koch]是岭南地区常用的民间草药，具有清热解毒、消肿散结之功。在已往的实验中，我们观察到海芋及其不同炮制品对干酵母性大鼠发热有抑制作用[1]。本实验用水提醇沉法把海芋分部提取，并观察不同提取部位对大鼠酵母性发热的抑制作用及对下丘脑PGE2含量的影响，以探讨其解热作用的有效部位及作用机理。
, 百拇医药
1 材料
1.1 药物制备 海芋鲜品采自白云山，取其根茎，洗净，削去粗皮，切片晒干。生品煎煮沸10小时，经低温浓缩至所需浓度备用，作为生药用药。另取生品10小时煎煮液，经低温浓缩至浓度为1∶1.6，加入95%乙醇，用酒精仪调节含醇量至75%，放置过夜，过滤，分别收集滤液和沉淀物。滤液减压回收乙醇，水浴飞去残醇，浓缩至所需浓度，为醇溶品；沉淀物加适量水溶解，水浴飞去残醇，浓缩至所需浓度，为非醇溶品。
阿斯匹林，广州明兴制药厂产品，批号为961205。
1.2 动物 SD系大白鼠，雄性，体重110～130 g，由广东省卫生厅医用实验动物场提供。
1.3 仪器及试剂 电脑数字型体温计，欧姆龙(中国)有限公司产品，型号为MC-3B。干酵母，法国Marcg产品。批号为940603。3H-PGE2放免试剂盒，由北京东亚免疫技术研究所提供。
, 百拇医药
2 方法
2.1 发热大鼠制备 参照文献方法[2]，将大鼠先于实验室(温度20℃±0.5℃，湿度40%～50%)中适应3天，每天测肛温2次，3天后进行正式实验。正式实验时，取适应好的大鼠，分成正常组、模型组、阳性组、模型+生药组、模型+醇溶品组、模型+非醇溶品组等6组，除正常组8只外，余均为10只。测定基础体温后，除正常组外，于大鼠背部皮下注射200 g/L干酵母生理盐水10 ml/kg，并于皮下注射4小时后，除正常组外，各组分别给予蒸馏水、阿斯匹林0.1 g/kg、生药、醇溶品、非醇溶品口服灌胃，后二者用从相同生品中的提取量，即均表示为相当于生品用量32 g/kg，给药容积均为10 ml/kg。皮下注射6小时后，即达发热高峰时，测量体温。以致热后6小时的体温减去基础体温作为发热峰值(△T)。
2.2 下丘脑的制备 待测完致热6小时后体温，立即断颈处死大鼠，参照文献方法[3]，沿上颌从颈椎处剪下头部，破坏颅底骨，在1分钟内采取下丘脑。下丘脑作为一团块取出，前面限制在视交叉前2 mm，后面至乳头体，侧面从下丘脑裂纹至离其底面3 mm的组织。取出后立即放入-20℃冰箱中保存。
, 百拇医药
2.3 PGE2含量测定 下丘脑中PGE2含量测定照说明书进行，最后在本校核医学教研室测量。以logit B/Bo为纵坐标，标准浓度为横坐标，依据样品管的结合率从标准曲线上查出样品浓度，以pg/mg湿重计。
2.4 资料统计 以发热峰值(△T)均数，PGE2含量均数作为评价指标，组间差异显著性用t检验，二者关系用直线相关分析方法。
3 结果
3.1 海芋对大鼠酵母性发热的抑制作用及对下丘脑中PGE2含量的影响，见附表。
附表 海芋对大鼠酵母性发热的抑制作用及对下丘脑中PGE2含量的影响(
±SD), http://www.100md.com
组 别
动物数(只)
剂量(g/kg)
△T(℃)
下丘脑中PGE2含量(pg/mg湿重)
正常组
8
-
0.05±0.28
2014.95±1270.76
模型组
10
, 百拇医药
-
1.60±0.37△
6852.18±2127.08△
阳性组
10
0.1
-0.48±0.31※ ※
1040.09±332.80※ ※
模型+生药组
10
32
, http://www.100md.com
0.99±0.73※
2282.73±257.82※ ※
模型+醇溶品组
10
32
0.66±0.23※ ※
1349.02±131.32※ ※
模型+非醇溶品组
10
32
1.34±0.72
, http://www.100md.com
2698.38±225.94※ ※
(注：△模型组与正常组比较，P<0.001；与模型组比较，※P<0.05，※※P<0.001)
结果显示，注射干酵母后6小时，大鼠体温及下丘脑PGE2都明显升高，模型组与正常组比较P<0.001。海芋生药、水提物醇溶部分能抑制大鼠酵母性体温升高(P<0.05，P<0.001)，而非醇溶部分没有抑制作用(P>0.20)，并且醇溶性部分显示比生药有更强的抑制趋势，说明海芋解热的有效部位主要在醇溶性部分。
以所有大鼠下丘脑PGE2含量对发热高峰作直线相关分析，二者成中度正相关(r＝0.7254，P<0.001)。海芋能抑制下丘脑中PGE2含量的升高(P<0.001)，显示海芋解热作用与其对下丘脑PGE2的抑制有关。
, 百拇医药
4 讨论
多种外源性的致热因子(如病原微生物、毒素、炎症灶等)均可刺激血液或组织中的吞噬细胞合成单释放内源性的致热源(EP)，并通过前列腺素(PG)，环核苷酸(CAMP)等中枢发热介质，主要作用于视前区-前下丘脑下部(POAH)的体温调节中枢，引起产热和/或散热中枢兴奋性的改变，引起发热反应[4]。
本实验采用干酵母性大鼠发热模型，揭示了海芋解热的有效部位主要在水提物醇溶性部分，表明其有效成分可能是生物碱、皂甙类物质。
对前列腺素和cAMP作为中枢发热介质，国外学者趋向于这样一种共识[5]：即PGE2不是神经介质，它或者其它PG可以诱生一种神经递质样物质，再引起调定点上移，并认为这种物质就是cAMP。国内有学者也观察到[6]，用降钙剂EGTA给家兔侧脑室注射后，脑脊液中cAMP比PGE2对体温上升具有更大的相关性。本实验直接测量下丘脑组织中PGE2含量，结果显示大鼠酵母性发热时体温上升与下丘脑中PGE2浓度升高呈中度正相关(r＝0.7254，P<0.001)，同时，在实验中，模型+非醇溶品组下丘脑中PGE2含量与模型组比较有显著降低(P<0.001)，而没有明显的解热作用，说明大鼠酵母性发热中枢介质除PGE2外，还有更深层的作用机制，是否为cAMP，值得进一步探讨。海芋能够抑制下丘脑中PGE2含量的升高，部分地解释了海芋解热作用的中枢作用机制。
, http://www.100md.com
(本实验得到本校核医学教研室老师的大力帮助，在此表示衷心谢意!)
参考文献
[1] 张俊荣，李育浩，吴清和，等.海芋及其不同炮制品煎剂解热作用初步实验研究.新中医，1997，29(8)∶31
[2] 陈 奇.中药药理实验方法学.北京∶人民卫生出版社，1993.298
[3] 徐叔云.药理实验方法学.第2版.北京∶人民卫生出版社，1994.2561
[4] 李楚杰.临床病理生理学(上册).广州∶广东科技出版社，1990.119～144
[5] Dinarello CA，et al.New concepts on the pathogenesis of fever，Rev Inf Dis，1988，(10)∶168
[6] 李楚杰.发热机制研究的新进展.中国病理生理杂志，1990，6(5)∶379
(修回日期：1998-10-21), 百拇医药
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